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2023-02-073280 次瀏覽
細(xì)胞復(fù)蘇

實驗材料:

基礎(chǔ)培養(yǎng)基                          

血清(常規(guī)為FBS/NBS

電動移液槍 

移液管[NEST]

無冰冰盒[NEST]

T25培養(yǎng)瓶[NEST]

自動旋蓋機[NEST]

盒裝無菌吸頭[NEST]

100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿[NEST]

15mL、50mL無菌離心管[NEST]

 

不能忘記的準(zhǔn)備:

1.記得一定要預(yù)定干冰?。?!不然你細(xì)胞取出來可沒地方待了,要是液氮罐距離實驗室遠(yuǎn)點,你的細(xì)胞可能就沒了。

2.用來轉(zhuǎn)移細(xì)胞的無冰冰盒一定要滅菌!??!當(dāng)然,如果條件刻苦點的泡沫盒,也不要偷懶,無論什么裝載容器,都要提前滅菌,可以有效規(guī)避污染風(fēng)險。

3.水浴鍋提前預(yù)熱至37℃。

4.培養(yǎng)基預(yù)熱至37℃。

 

要開始了!(敲黑板):

1.在生物樣本庫中搜尋到目標(biāo)細(xì)胞,在液氮罐找到對應(yīng)的細(xì)胞,放入預(yù)先準(zhǔn)備好的無冰冰盒(容器)內(nèi)。冰盒內(nèi)裝有碎干冰,冰芯的鋁合金外殼協(xié)同高導(dǎo)熱的合金模塊,確保樣品能快速冷卻,孔之間的溫度差異小于0.1℃,能很好的維持樣品間的溫度一致性。

2.在細(xì)胞進入水浴鍋解凍前,務(wù)必將凍存管豎直立在桌面上10~20s,這樣之后,可能排空存在在凍存管蓋縫隙內(nèi)的液氮。尤其是外旋蓋的凍存管,特別要注意!不然在水浴解凍的時候有概率會砰的一聲爆發(fā)出來!極為危險。

3.將凍存管在37℃水浴鍋內(nèi)水浴解凍,因為DMSO在常溫情況下對細(xì)胞有毒副作用,若解凍時間過長,會導(dǎo)致細(xì)胞損傷并影響其存活率,所以一定要快,解凍過程在1~2min內(nèi)完成。

4.解凍完成后,在生物安全柜內(nèi),用自動旋蓋機打開凍存管,之后在移液槍將凍存管內(nèi)細(xì)胞復(fù)懸,然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含有5~10ml培養(yǎng)基的離心管中,1000rmp離心5min(根據(jù)各自細(xì)胞的特新調(diào)整離心力和離心時間)。如果沒有培養(yǎng)基稀釋,在離心過程中較高濃度的DMSO會對細(xì)胞損傷,影響活存活率!

5.丟棄上清,里面還有DMSO和死去細(xì)胞的裂解產(chǎn)物,這不是我們所需要的。將剩余的細(xì)胞用培養(yǎng)基稀釋復(fù)懸,稀釋比例為1:10~1:15,再按照大家各自實驗需求,分裝到100mm培養(yǎng)皿或者T25瓶中,顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài),然后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

復(fù)蘇后的注意點:

復(fù)蘇后記得每天都要觀察細(xì)胞狀態(tài),及時更換培養(yǎng)基,確保細(xì)胞所需營養(yǎng)的充足和生長環(huán)境的清潔。

 

使用到的NEST產(chǎn)品:

移液管[NEST]

無冰冰盒[NEST]

T25培養(yǎng)瓶[NEST]

自動旋蓋機[NEST]

盒裝無菌吸頭[NEST]

100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿[NEST]

15mL、50mL無菌離心管[NEST]

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