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2022-11-233852 次瀏覽
培養(yǎng)基配制與儲(chǔ)存

實(shí)驗(yàn)材料:

基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體或干粉)                PET/PETG方形試劑瓶[NEST]

血清(常規(guī)為FBS/NBS)                   補(bǔ)充劑

移液槍                                              電動(dòng)移液槍

15mL、50mL無菌離心管[NEST]        滅菌超純水                     

盒裝無菌吸頭[NEST]                          血清移液管[NEST]

超凈工作臺(tái)                                        雙抗(青鏈霉素混合液)

杯式濾器(0.22μm PES膜) [NEST]       針式濾器 (0.22μm PES膜) [NEST]    


實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:

血清準(zhǔn)備:

配置培養(yǎng)基前一天,將所需血清從-20℃冰庫(kù)取出,放置入2-8℃冰箱緩慢解凍儲(chǔ)存,使用前37℃水浴加熱。

培養(yǎng)基準(zhǔn)備:

液體基礎(chǔ)培養(yǎng)基使用前37℃水浴加熱。


實(shí)驗(yàn)流程:

基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置(干粉):

根據(jù)配置體積,選擇合適的滅菌后容器,在容器中倒入約90%體積的超純水,將培養(yǎng)基干粉全部倒入該容器中,用少量超純水將袋內(nèi)殘留粉末洗出。

攪拌30min使所有成分完全溶解,待溶液澄清后,根據(jù)說明書加入適當(dāng)量的碳酸氫鈉(分析純),繼續(xù)攪拌5-10min至溶解,隨后超純水定容并調(diào)節(jié)PH值。(過濾會(huì)使培養(yǎng)基PH值稍微偏高,所以用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)整PH值至7.20-7.30)

使用0.22μm杯式濾器[NEST]或0.22μm針式濾器[NEST]過濾除菌,并按照日常使用規(guī)格分裝入PET/PETG方形試劑瓶[NEST]中,2-8℃條件下避光保存?zhèn)溆?。【菌檢合格后方可使用】


培養(yǎng)基配置:

若含有補(bǔ)充劑,用1000μL無菌吸頭[NEST]取出適量預(yù)熱完成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,注入補(bǔ)充劑西林瓶中,將其充分溶解,再將含有補(bǔ)充劑的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。

接著按照血清使用比例,用血清移液管[NEST]吸取適量預(yù)熱完成的血清,注入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,蓋上瓶蓋充分混勻。


雙抗加入:

除了特殊篩選系統(tǒng)外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不添加任何抗生素。若為防止細(xì)菌、真菌污染,或懷疑細(xì)胞污染需要清除細(xì)菌,可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液,其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉素100U/ml,鏈霉素為100ug/ml。


培養(yǎng)基保存:

將配置后的完全培養(yǎng)基2-8℃條件下,避光保存?zhèn)溆?;或按照使用需求分裝入對(duì)應(yīng)規(guī)格的PET/PETG方形試劑瓶[NEST]中。隔夜或1-2天后觀察完全培養(yǎng)基,溶液澄清通透且無染菌,方可使用。

使用多余的血清,按照剩余量,可分裝入15mL/50mL的無菌離心管[NEST]中(防止血清凍存后膨脹泄露問題,離心管工作體積建議為80%),亦可分裝入合適規(guī)格的PET/PETG方形試劑瓶[NEST]中,并用封口膜封口,-20℃條件下避光保存。


使用到的NEST產(chǎn)品:

15mL、50mL無菌離心管[NEST]           PET/PETG方形試劑瓶[NEST]

盒裝無菌吸頭[NEST]                            血清移液管[NEST]

杯式濾器(0.22μm PES膜) [NEST]          針式濾器 (0.22μm PES膜) [NEST]                     

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